你應知道(dào)的(de)新型冠狀病毒2019-nCoV實驗室檢測内容都在(zài)這(zhè)了(le／liǎo)

血液學檢查

病毒感染相關的(de)血液學檢查主要(yào / yāo)包括血常規、血生化以(yǐ)及其他(tā)針對性的(de)檢測項目，相關指标爲(wéi / wèi)臨床常用的(de)病毒感染診斷指标，爲(wéi / wèi)疾病的(de)輔助診斷提供依據。

1、血常規

血常規中的(de)許多項具體指标都是(shì)一(yī / yì ／yí)些常用的(de)敏感指标，對機體内許多病理改變都有敏感反映，其中又以(yǐ)白細胞計數、紅細胞計數、血紅蛋白和(hé / huò)血小闆最具有診斷參考價值，許多患者在(zài)病因不(bù)明時(shí)可以(yǐ)做血常規檢查對其進行輔助診斷。此外，血常規檢查還是(shì)觀察治療效果、用藥或停藥、繼續治療或停止治療、疾病複發或痊愈的(de)常用指标。

NCOVID19肺炎發病初期白細胞總數大(dà)部分降低或正常，淋巴細胞計數減少，單核細胞增加或正常。淋巴細胞絕對值如果小于(yú)0.8×109/L，一(yī / yì ／yí)般建議3 d後複查血液常規變化。根據鍾南山院士的(de)最新研究發現82.1％的(de)患者淋巴細胞減少、36.2％的(de)患者血小闆減少，總體患者中觀察到(dào)白細胞減少的(de)比例約占33.7％，嚴重病例白細胞、淋巴細胞減少、血小闆減少明顯。

2、血生化：肝酶、心肌酶、乳酸脫氫酶、肌紅蛋白、肌鈣蛋白

血生化是(shì)檢測存在(zài)于(yú)血液中的(de)各種離子(zǐ)、糖類、脂類、蛋白質以(yǐ)及各種酶、激素和(hé / huò)機體的(de)多種代謝産物的(de)含量，可以(yǐ)爲(wéi / wèi)醫生提供診斷與治療依據，并能幫助臨床确定病情、監測治療效果。

NCOVID19肺炎部分患者出(chū)現肝酶、心肌酶、乳酸脫氫酶、血沉和(hé / huò)肌紅蛋白增高，部分危重者可見肌鈣蛋白增高。

3、其他(tā)檢測項目：C反應蛋白（CRP）、降鈣素原（PCT）、D-二聚體、血沉、凝血像、血氣分析、乳酸等

針對感染性疾病臨床上(shàng)常采用各種針對性的(de)檢測項目進行輔助診斷，爲(wéi / wèi)醫生提供診斷與治療依據。

CRP和(hé / huò)PCT的(de)檢測對鑒别是(shì)否合并肺部的(de)細菌感染有一(yī / yì ／yí)定價值，多數NCOVID19患者CRP和(hé / huò)血沉升高，重症患者D-二聚體明顯升高，同時(shí)出(chū)現凝血功能的(de)障礙，外周血管的(de)微血栓形成。此外，血氣分析有助于(yú)判斷重症患者的(de)氧合情況，結合乳酸的(de)升高可以(yǐ)篩查高危的(de)氧合障礙患者

CT醫學影像檢查

CT是(shì)用X線束對人(rén)體某部一(yī / yì ／yí)定厚度的(de)層面進行掃描，由探測器接收透過該層面的(de)X線，轉變爲(wéi / wèi)可見光後，由光電轉換變爲(wéi / wèi)電信号，再經模拟/數字轉換器（analog/digitalconverter）轉爲(wéi / wèi)數字，輸入計算機處理。

新冠病毒CT的(de)影像學表現與很多其他(tā)病毒性肺炎，如流感、呼吸道(dào)合胞病毒、腺病毒感染等比較類似，很難做鑒别性診斷。CT（電子(zǐ)計算機斷層掃描）作爲(wéi / wèi)臨床影像學篩查指标具有重要(yào / yāo)價值，另外無論從早期診斷、鑒别診斷、排除診斷還是(shì)最終确診等方面都還具有一(yī / yì ／yí)定的(de)局限性，更無法替代病原學診斷。因此，目前的(de)技術水平下，最終的(de)确診還是(shì)要(yào / yāo)靠試劑盒核酸檢測。

呼吸道(dào)病原學檢測

呼吸道(dào)病原學檢測是(shì)指采用醫學檢測技術手段針對進入人(rén)體的(de)呼吸道(dào)病原體進行檢測，其目的(de)是(shì)确定呼吸道(dào)病原體感染的(de)發生和(hé / huò)性質，在(zài)疾病早期提供恰當的(de)治療方案，并采取有效的(de)預防措施，防止感染傳播造成的(de)危害。

呼吸道(dào)病原學檢測均爲(wéi / wèi)病原體的(de)針對性檢測，醫學上(shàng)在(zài)使用某種針對性檢測項目做臨床診斷時(shí)常用敏感性（Sensitivity）和(hé / huò)特異性（Specificity）來(lái)衡量檢測項目的(de)準确度和(hé / huò)有效性。因此我們在(zài)這(zhè)裏先把敏感性和(hé / huò)特異性的(de)概念及其影響講清楚。

如圖所示，試驗指各類檢測項目，在(zài)評價某種檢測項目鑒别區分病例組（陽性病例）和(hé / huò)非病例組（陰性病例）的(de)能力時(shí)，将病例的(de)真實情況作爲(wéi / wèi)橫坐标，檢測項目得出(chū)的(de)檢測結果作爲(wéi / wèi)縱坐标，真實情況與檢測結果一(yī / yì ／yí)緻時(shí)檢測結果爲(wéi / wèi)真，不(bù)一(yī / yì ／yí)緻時(shí)檢測結果爲(wéi / wèi)假。由此引申出(chū)敏感性和(hé / huò)特異性等概念如下：

A.敏感性（具有該特性的(de)對象被預知的(de)可能性大(dà)小）=真陽性率=a/a+c；

B.特異性（對象所具有的(de)特殊屬性的(de)程度）=真陰性率=d/b+d；

C.漏診率=1-敏感性=c/a+c；

D.誤診率=1-特異性=b/b+d

此外，最重要(yào / yāo)的(de)是(shì)可以(yǐ)借由上(shàng)圖分析敏感性與特異性的(de)關系：

A. 高敏感性→上(shàng)述a增大(dà)→L線下移，無限接近X軸→c、d越來(lái)越小，b越來(lái)越大(dà)，即低漏診率，高誤診率和(hé / huò)低特異性（低真陰性率）。

B. 高特異性→上(shàng)述d增大(dà)→L線上(shàng)移，無限接近+∞→a、b越來(lái)越小，c越來(lái)越大(dà)，即高漏診率，低誤診率和(hé / huò)低敏感性（低真陽性率）。

由此可見，高敏感性與高特異性不(bù)可兼得，高敏感性則低特異性，高特異性則低敏感性。可采用敏感性高與特異性高的(de)不(bù)同檢測方法相結合的(de)方式提高整體檢測的(de)準确度。

接下來(lái)我們向大(dà)家介紹病原學檢測的(de)各種技術方法：

1、病毒培養分離與鑒定

病毒培養一(yī / yì ／yí)般有細胞培養和(hé / huò)雞胚培養（9-11日齡雞胚）這(zhè)兩種方法。從呼吸道(dào)标本培養分離出(chū)的(de)病毒進行鑒定常作爲(wéi / wèi)呼吸道(dào)病原體實驗室診斷的(de)金标準，其敏感性和(hé / huò)特異性均在(zài)90%以(yǐ)上(shàng)，但多數病毒培養比較困難，技術難度高且操作複雜，生物安全條件要(yào / yāo)求高，檢測周期長，一(yī / yì ／yí)般不(bù)應用于(yú)臨床檢測。

國(guó)家衛健委發布的(de)《流行性感冒診療方案（2019年版）》指出(chū)“從呼吸道(dào)标本培養分離出(chū)流感病毒是(shì)流感診斷的(de)金标準。但由于(yú)病毒培養周期較長，生物安全條件要(yào / yāo)求高，不(bù)建議應用于(yú)臨床診療”。無獨有偶，在(zài)目前公布的(de)各項新型冠狀病毒2019-nCoV防治診療指南中均未把病毒培養分離與鑒定列入病原學檢測項目。

2、病毒抗原檢測

病毒的(de)結構一(yī / yì ／yí)般由外層的(de)衣殼蛋白包含病毒核酸物質組成，一(yī / yì ／yí)般來(lái)說(shuō)病毒的(de)衣殼蛋白可作爲(wéi / wèi)病毒抗原（Virus antigen）通過病毒抗原檢測技術被檢測到(dào)。病毒抗原檢測技術主要(yào / yāo)采用免疫層析技術，利用具有高度特異的(de)單克隆抗體來(lái)識别呼吸道(dào)标本中的(de)病毒抗原，待測樣本中如有相對應的(de)抗原，與試劑闆中包被的(de)抗體結合，抗體上(shàng)面标記的(de)物質呈現顔色變化，出(chū)現對應條帶，通過觀察條帶可以(yǐ)得到(dào)相關的(de)檢測結果。抗體标記物一(yī / yì ／yí)般爲(wéi / wèi)膠體金、乳膠顆粒和(hé / huò)量子(zǐ)點熒光納米微球等材料。這(zhè)個(gè)方法在(zài)臨床應用中操作簡便，速度快，10-15分鍾就(jiù)可獲得檢測結果，可以(yǐ)做床旁檢測。病毒感染人(rén)體後一(yī / yì ／yí)般會經曆一(yī / yì ／yí)段時(shí)間的(de)“潛伏”進行病毒複制，随後病毒大(dà)量排出(chū)引發病理反應。病毒抗原檢測标本一(yī / yì ／yí)般爲(wéi / wèi)上(shàng)呼吸道(dào)标本，一(yī / yì ／yí)般采用口咽拭子(zǐ)或鼻咽拭子(zǐ)進行取樣，在(zài)發病初期具有良好的(de)檢測效果，但随病情的(de)發展和(hé / huò)治療其檢測陽性率有所下降。

目前臨床上(shàng)應用最廣泛的(de)病毒抗原快速檢測技術是(shì)針對流行性感冒的(de)檢測，全國(guó)有超過10家廠家可生産針對流感病毒抗原快速檢測的(de)試劑。流感抗原檢測的(de)靶标一(yī / yì ／yí)般是(shì)流感病毒NP和(hé / huò)MP蛋白，可以(yǐ)确定病毒是(shì)甲型還是(shì)乙型，但無法确定病毒的(de)亞型。流感病毒抗原檢測一(yī / yì ／yí)般采用膠體金标記，也(yě)有采用熒光标記法進行标記的(de)，熒光标記法會比膠體金标記的(de)方法敏感性更高，多需相應儀器，如熒光顯微鏡，熒光檢測設備。流感病毒抗原檢測試劑的(de)敏感性受到(dào)抗體原料和(hé / huò)标記物性能的(de)影響極大(dà)，使不(bù)同廠家檢測試劑的(de)敏感性跨度較大(dà)，一(yī / yì ／yí)般在(zài)20%-70%之(zhī)間，并且在(zài)病毒載量較低時(shí)無法檢測到(dào)目标病毒，檢測陰性不(bù)能作爲(wéi / wèi)排除流感感染的(de)診斷标準，各廠家流感抗原檢測試劑的(de)特異性一(yī / yì ／yí)般在(zài)90%以(yǐ)上(shàng)，因此檢測陽性支持診斷。在(zài)國(guó)家衛健委發布的(de)《流行性感冒診療方案（2019年版）》中推薦流感病毒抗原檢測可作爲(wéi / wèi)确診方法，但同時(shí)也(yě)提示其檢測陰性不(bù)能排除流感。抗原檢測方法因其快速方便，特異性好，比較容易在(zài)各層級醫院中普及。

反觀針對新型冠狀病毒2019-nCoV抗原的(de)檢測則尚處于(yú)前期研發階段，尚無有注冊申報的(de)産品出(chū)來(lái)，究其主要(yào / yāo)原因應與試劑原材料有關，主要(yào / yāo)是(shì)目前尚無法獲得針對新型冠狀病毒2019-nCoV抗原蛋白特異性高的(de)單克隆抗體。盡管早在(zài)2020年1月底就(jiù)有公司聲稱獲得了(le／liǎo)新型冠狀病毒2019-nCoV抗原蛋白的(de)抗體，至今也(yě)有數家公司宣布可對外提供相應抗體，但通過查詢相關信息并進行深入分析可得知目前可提供的(de)新型冠狀病毒2019-nCoV抗原蛋白抗體應均爲(wéi / wèi)通過動物免疫獲得的(de)多抗而(ér)并非單克隆抗體，如采用多抗作爲(wéi / wèi)原料生産新型冠狀病毒2019-nCoV抗原檢測試劑則會對試劑檢測結果造成極大(dà)影響。即使經過一(yī / yì ／yí)段時(shí)間的(de)研發和(hé / huò)生産有公司可提供針對新型冠狀病毒2019-nCoV抗原蛋白的(de)單克隆抗體，其作爲(wéi / wèi)原材料加入到(dào)抗原檢測試劑中的(de)效果仍需要(yào / yāo)大(dà)批臨床實驗數據的(de)驗證。然而(ér)流感病毒在(zài)全球範圍内肆虐百年，并且每年有周期性的(de)流行，國(guó)内外能夠生産流感病毒抗原單克隆抗體的(de)廠家超過百家，因此生産抗原檢測試劑的(de)廠家可以(yǐ)獲得性能較好的(de)單克隆抗體原材料進行研發和(hé / huò)生産，最終獲得流感病毒抗原檢測試劑。綜上(shàng)所述，新型冠狀病毒2019-nCoV抗原檢測試劑尚有很長的(de)一(yī / yì ／yí)段路要(yào / yāo)走，但一(yī / yì ／yí)旦試劑研發成功并獲得國(guó)家藥監局的(de)注冊審批則完全可以(yǐ)快速應用到(dào)臨床，以(yǐ)其操作簡單、檢測速度快、特異性高、易普及等優點會快速被各層級醫療機構廣泛接受。

3、病毒抗體檢測

抗體（Antibody）是(shì)指機體由于(yú)抗原的(de)刺激而(ér)産生的(de)具有保護作用的(de)蛋白質，是(shì)一(yī / yì ／yí)種由漿細胞（效應B細胞）分泌，被免疫系統用來(lái)鑒别與中和(hé / huò)外來(lái)物質如細菌、病毒等的(de)大(dà)型Y形蛋白質，僅被發現存在(zài)于(yú)脊椎動物的(de)血液等體液中，及其B細胞的(de)細胞膜表面。抗體是(shì)一(yī / yì ／yí)類能與抗原特異性結合的(de)免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)，由四條多肽鏈組成，各肽鏈之(zhī)間由數量不(bù)等的(de)鏈間二硫鍵連接，大(dà)緻可分爲(wéi / wèi)5類，即IgM、IgD、IgG、IgA和(hé / huò)IgE。人(rén)體在(zài)接觸外來(lái)抗原（Antigen）的(de)時(shí)候，最早産生的(de)抗體是(shì)IgM，是(shì)由B細胞表面受體直接分泌，産生IgM的(de)B細胞進入淋巴結，在(zài)發生中心接受T細胞和(hé / huò)抗原提呈細胞的(de)刺激，進一(yī / yì ／yí)步成熟，分化爲(wéi / wèi)漿細胞，大(dà)量産生IgG。

目前臨床上(shàng)針對抗體的(de)檢測一(yī / yì ／yí)般也(yě)采用前面抗原檢測中提到(dào)的(de)免疫層析技術，但檢測試劑原料與抗原檢測不(bù)同，抗體檢測是(shì)利用病毒抗原蛋白來(lái)識别血液标本中的(de)病毒由病毒感染所産生的(de)抗體，一(yī / yì ／yí)般針對血液中病毒特異性的(de)IgM和(hé / huò)IgG進行檢測。

IgM是(shì)初次體液免疫應答中最早出(chū)現的(de)抗體，IgG是(shì)血清和(hé / huò)體液中含量最高的(de)抗體，占血清總Ig的(de)75%～80%，其親和(hé / huò)力高，在(zài)體内分布廣泛。抗體檢測的(de)方法，之(zhī)前應用的(de)比較多，但随着我們認知的(de)逐漸提高，在(zài)2019年的(de)流感診療方案中已經很明确流感病毒IgG 抗體水平恢複期比急性期呈4 倍或以(yǐ)上(shàng)升高僅有回顧性診斷意義，無法用于(yú)病毒感染的(de)診斷，而(ér)IgM 抗體檢測敏感性較低，不(bù)建議常規使用。其實不(bù)僅是(shì)不(bù)适合流感的(de)診斷，大(dà)多數呼吸道(dào)病毒都不(bù)需要(yào / yāo)這(zhè)種抗體檢測方法，其主要(yào / yāo)原因是(shì)抗體一(yī / yì ／yí)般在(zài)患者恢複期才大(dà)量産生，時(shí)效性差，無法作爲(wéi / wèi)病毒感染的(de)早期診斷，對傳染性極高新型冠狀病毒2019-nCoV的(de)診斷和(hé / huò)防控毫無意義。因此，目前各項新型冠狀病毒2019-nCoV防治診療指南中均未把病毒抗體檢測列入病原學檢測項目。

4、病毒核酸檢測

所有生物除朊病毒外都含有核酸，核酸包括脫氧核糖核酸（DNA）和(hé / huò)核糖核酸（RNA），新型冠狀病毒是(shì)一(yī / yì ／yí)種僅含有RNA的(de)病毒，病毒中特異性RNA序列是(shì)區分該病毒與其它病原體的(de)标志物。新型冠狀病毒2019-nCoV出(chū)現後，我國(guó)科學家在(zài)極短的(de)時(shí)間裏完成了(le／liǎo)對新型冠狀病毒2019-nCoV全基因組序列的(de)解析，并通過與其它物種的(de)基因組序列對比，發現了(le／liǎo)新型冠狀病毒2019-nCoV中的(de)特異核酸序列。臨床實驗室檢測過程中，如果能在(zài)患者樣本中檢測到(dào)新型冠狀病毒2019-nCoV的(de)特異核酸序列，應提示該患者可能被新型冠狀病毒2019-nCoV感染。

檢測新型冠狀病毒2019-nCoV特異核酸序列的(de)方法最常見的(de)是(shì)熒光定量PCR（聚合酶鏈式反應）。因PCR反應模闆僅爲(wéi / wèi)DNA，而(ér)新型冠狀病毒2019-nCoV爲(wéi / wèi)RNA病毒，因此在(zài)進行PCR反應前，應将新型冠狀病毒核酸（RNA）逆轉錄爲(wéi / wèi)DNA。在(zài)PCR反應體系中，包含一(yī / yì ／yí)對特異性引物以(yǐ)及一(yī / yì ／yí)個(gè)探針，該探針爲(wéi / wèi)一(yī / yì ／yí)段特異性寡核苷酸序列，兩端分别标記了(le／liǎo)報告熒光基團和(hé / huò)淬滅熒光基團。探針完整時(shí)，報告基團發射的(de)熒光信号被淬滅基團吸收；如反應體系存在(zài)靶序列，PCR反應時(shí)探針與模闆結合，DNA聚合酶沿模闆利用酶的(de)外切酶活性将探針酶切降解，報告基團與淬滅基團分離，發出(chū)熒光。每擴增一(yī / yì ／yí)條DNA鏈，就(jiù)有一(yī / yì ／yí)個(gè)熒光分子(zǐ)産生。熒光定量PCR儀能夠監測出(chū)熒光到(dào)達預先設定阈值的(de)循環數（Ct值）與病毒核酸濃度有關，病毒核酸濃度越高，Ct值越小。

核酸檢測是(shì)分子(zǐ)診斷的(de)主要(yào / yāo)技術手段，是(shì)當前臨床病原微生物診斷技術的(de)前沿，是(shì)肺部感染診斷技術的(de)發展方向，該方法的(de)敏感性超過90%，特異性更是(shì)接近100%，目前已經在(zài)臨床上(shàng)被廣泛用于(yú)各種呼吸道(dào)病原體的(de)确診檢測。國(guó)家衛健委發布的(de)《流行性感冒診療方案（2019年版）》中指出(chū)“：病毒核酸檢測的(de)敏感性和(hé / huò)特異性很高，且能區分病毒類型和(hé / huò)亞型。目前主要(yào / yāo)包括實時(shí)熒光定量PCR 和(hé / huò)快速多重PCR。熒光定量PCR 法可檢測呼吸道(dào)标本（鼻拭子(zǐ)、咽拭子(zǐ)、鼻咽或氣管抽取物、痰）中的(de)流感病毒核酸，且可區分流感病毒亞型。” 在(zài)目前公布的(de)各項新型冠狀病毒2019-nCoV防治診療指南中均把呼吸道(dào)或血液标本中的(de)新型冠狀病毒2019-nCoV核酸檢測陽性定爲(wéi / wèi)确診方法。

但随着新型冠狀病毒2019-nCoV核酸檢測試劑的(de)廣泛投入使用，越來(lái)越多的(de)問題暴露出(chū)來(lái)，其中最引人(rén)注意的(de)是(shì)病毒核酸檢測出(chū)現過多假陰性的(de)問題，敏感性超過90%核酸檢測試劑爲(wéi / wèi)何存在(zài)較多的(de)假陰性結果，我們針對此問題也(yě)整理了(le／liǎo)相關資料并在(zài)此進行詳細描述。總體上(shàng)講核酸檢測的(de)結果受到(dào)疾病發展過程、标本采集、标本保存與運輸、核酸提取、擴增體系、檢測操作環境以(yǐ)及人(rén)員操作等因素的(de)影響。

5、病原學檢測方法的(de)選擇：

由于(yú)新型冠狀病毒2019-nCoV的(de)臨床研究有限，因此我們參考流感檢測時(shí)間窗口明确當前新冠病毒2019-nCoV的(de)實驗室檢測方法的(de)選擇。根據流感檢測的(de)時(shí)間窗口我們可以(yǐ)看到(dào)比如POCT、熒光檢測技術、病毒分離培養法、RT-PCR、抗體檢測等方法，它們檢測的(de)時(shí)間和(hé / huò)時(shí)間段有所不(bù)同，病毒抗原檢測（以(yǐ)POCT或熒光檢測技術開展），病毒分離培養法和(hé / huò)核酸檢測（以(yǐ)RT-PCR技術開展）的(de)檢測窗口靠前，抗體檢測滞後。呼吸道(dào)病毒診斷做抗體檢測或者培養在(zài)臨床診斷中價值不(bù)高，前者影響因素太多（如産生抗體的(de)時(shí)間窗較長，受人(rén)體自身免疫狀況影響較大(dà)），後者很難滿足即時(shí)檢測的(de)需求。因此在(zài)各項指南和(hé / huò)共識中指出(chū)目前臨床上(shàng)針對流感病毒的(de)病原學檢測集中于(yú)抗原檢測和(hé / huò)核酸檢測兩項，而(ér)針對新型冠狀病毒2019-nCoV的(de)病原學檢測僅限于(yú)核酸檢測。

總結

針對上(shàng)文論述，我們總結了(le／liǎo)不(bù)同方法學的(de)差異：

中華人(rén)民共和(hé / huò)國(guó)國(guó)家衛生健康委員會發布的(de)《新型冠狀病毒感染的(de)肺炎診療方案（試行第五版修正版）》、《新型冠狀病毒肺炎防控方案（第四版）》、《WS 286-2008 傳染性非典型肺炎診斷标準》、《流行性感冒診療方案（2019年版）》

武漢大(dà)學中南醫院新型冠狀病毒感染的(de)肺炎防治課題組發布的(de)《新型冠狀病毒(2019-nCoV)感染的(de)肺炎診療快速建議指南（标準版）》

北京協和(hé / huò)醫院發布的(de)《關于(yú)“新型冠狀病毒感染的(de)肺炎”診療建議方案（V2.0）》

中華醫學會兒科學分會呼吸學組呼吸道(dào)感染協作組發布的(de)《兒童呼吸道(dào)感染微生物檢驗标本采集轉運與檢測建議（病毒篇）》